AAT Bioquest  13812  Amplite® Fluorimetric L-Lactate Dehydrogenase (LDH) Assay Kit 200Tests 

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

 AAT Bioquest熒光L-乳酸脫氫酶LDH試劑盒

AAT Bioquest13812 Amplite® Fluorimetric L-Lactate Dehydrogenase (LDH) Assay Kit 200Tests，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：13812

產(chǎn)品名稱：Amplite®熒光L-乳酸脫氫酶（LDH）測定試劑盒

英文名稱：Amplite® Fluorimetric L-Lactate Dehydrogenase (LDH) Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

產(chǎn)品說明：

乳酸脫氫酶（LDH）是一種氧化還原酶，可催化**酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)化。LDH存在于多種生物體的細胞質(zhì)中，包括動物和植物。細胞在組織損傷或紅細胞溶血后將LDH釋放到血液中。由于LDH是一種相當穩(wěn)定的酶，因此已被廣泛用于評估組織和細胞的損傷和*性的存在。LDH的定量具有廣泛的應(yīng)用。在某些病理條件下，如癌癥，LDH也會升高。該 Amplite® 乳酸脫氫酶檢測試劑盒提供了一種基于熒光的方法，用于檢測血清、血漿、尿液等生物樣品以及細胞培養(yǎng)樣品中的 L-乳酸脫氫酶 （L-LDH）。在酶偶聯(lián)測定中，LDH與由熒光NADH傳感器專門監(jiān)測的NADH濃度成比例相關(guān)。該測定對L-LDH具有特異性。熒光信號可由熒光酶標儀讀取。使用該熒光 Amplite® L-乳酸脫氫酶檢測試劑盒，我們能夠在 1 μL 反應(yīng)體積中檢測到低至 100 mU/mL 的 L-乳酸脫氫酶。

平臺

吸光度酶標儀

吸光度 575/605 納米

推薦板 純白色

熒光酶標儀

Excitation 540 納米

Emission 590 納米

Cutoff     570 納米

推薦板 純黑色

組件

組分A：酶探針 1瓶（凍干粉）

組分B：檢測緩沖液 1 瓶 （10 mL）

組件 C：NAD 1瓶

組分 D：L-LDH 10 U/瓶

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備L-乳酸脫氫酶工作溶液（50μL）

2. 加入L-乳酸脫氫酶標準品或測試樣品（50μL）

3. 在室溫下孵育30分鐘-2小時

4. 在Ex/Em = 540/590 nm處監(jiān)測熒光增加

重要注意事項

在開始實驗之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD 儲備液 （100X）：

加入 100 μL H₂O放入NAD（組分C）的小瓶中，制成100X NAD儲備溶液。

2. L-LDH標準溶液（100 U/mL）：

加入100 μL H₂O或1X PBS緩沖液放入L-LDH標準品（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL L-LDH標準溶液。

標準溶液的制備

L-乳酸脫氫酶標準

將 10 μL L-LDH 標準溶液加入 990 μL 1X PBS 緩沖液中，生成 1000 mU/mL L-LDH 標準溶液。取1000 mU/mL L-LDH標準溶液進行1：3連續(xù)稀釋，得到L-LDH標準品（L-LDH1 - L-LDH7）的連續(xù)稀釋液。注意：稀釋的L-LDH標準溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。

工作溶液的制備

1. 將 10 mL 檢測緩沖液（組分 B）加入酶探針（組分 A）瓶中，以獲得酶探針混合物。注意：這種酶探針混合物足以用于兩個 96 孔板。

2. 將 50 μL NAD 儲備溶液 （100X） 加入 5 mL 酶探針混合物中，并充分混合。注意：這種L-LDH工作溶液不穩(wěn)定，應(yīng)及時使用。

實驗方案樣本

表 1.L-LDH標準品和測試樣品在純黑色96孔微孔板中的布局。L-LDH = L-LDH 標準品 （L-LDH1 - L-LDH7， 0.3 至 300 mU/mL）;BL = 空白控件;TS = 測試樣品。

提單 提單 TS TS

L-乳酸丁酸甘油酯1 L-乳酸丁酸甘油酯1 ... ...

L-乳酸丁酸甘油酯2 L-乳酸丁酸甘油酯2 ... ...

L-乳酸丁酸甘油酯3 L-乳酸丁酸甘油酯3    

L-乳酸丁酸甘油酯4 L-乳酸丁酸甘油酯4    

L-乳酸丁酸甘油酯5 L-乳酸丁酸甘油酯5    

L-乳酸丁酸甘油酯6 L-乳酸丁酸甘油酯6    

L-乳酸丁酸甘油酯7 L-乳酸丁酸甘油酯7    

表 2.每個孔的試劑組成。

井 卷 試劑

L-乳酸丁酸1 - L-

乳酸丁酸7 50 微升 連續(xù)稀釋（0.3 至 300 mU/mL）

提單 50 微升 稀釋緩沖液

TS 50 微升 測試樣品

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備L-LDH標準品（L-LDH），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向L-LDH標準品、空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 μL L-LDH工作溶液，使總測定體積為100 μL/孔。對于 384 孔板，向每個孔中加入 25 μL 工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應(yīng)物在室溫下孵育30分鐘至2小時，避光。

4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530 - 570 nm，發(fā)射= 590 - 600 nm（最佳Ex / Em = 540 / 590 nm，在570 nm處截止）監(jiān)測熒光增加。注意：板的內(nèi)容物也可以轉(zhuǎn)移到白色/透明底板上，并通過吸光度酶標儀以A的比例讀取575納米/一個605納米.然而，與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測的靈敏度較低。

  AAT Bioquest熒光L-乳酸脫氫酶LDH試劑盒

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