AAT Bioquest11501 Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence* 500Tests 

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest11501 Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence* 500Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：11501

產品名稱：Amplite®熒光過氧化氫測定試劑盒*紅色熒光*

英文名稱：Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence*

產品規格：500 Tests

AATBioquestAmplite熒光過氧化氫測定試劑盒 

產品說明：

過氧化*（H2O2）是一種活性氧代謝副產物，可作為許多氧化應激相關狀態的關鍵調節劑。它涉及許多與哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質疏松癥、許多神經退行性疾病和唐氏綜合癥有關的生物事件。也許H2O2生物學最有趣的方面是最近的報道，即抗體具有將分子氧轉化為過氧化*的能力，有助于免疫系統的正常識別和破壞過程。測量這種反應性物質將有助于確定氧化應激如何調節不同的細胞內途徑。Amplite 過氧化*檢測試劑盒使用我們的 Amplite®® Red 過氧化物酶底物來定量溶液和細胞提取物中的過氧化*。它還可用于通過酶偶聯反應檢測各種氧化酶活性。該試劑盒是一種優化的“混合和讀取"檢測，與 HTS 液體處理儀器兼容。

組件

組分A：安培™紅過氧化物酶底物 1瓶

組分B：H2O2 1 瓶（3% 穩定溶液，200 μL）

組分C：檢測緩沖液 1 瓶 （100 mL）

組分D：辣根過氧化物酶 1瓶（20單位）

構成部分E：DMSO 1 瓶 （1 mL）

示例協議

一目了然

協議摘要

1. 準備 H₂O₂工作溶液 （50 μL）

2. 添加 H₂O₂標準品或測試樣品 （50 μL）

3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘

4. 監測Ex/Em = 540/590 nm處的熒光強度

重要說明

在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

重要說明

組分A在DTT和β-巰基乙*等硫醇存在下不穩定。硫醇高于10 uM（終濃度）會顯著降低測定動態范圍。

重要說明

NADH和谷胱gan肽（還原形式：GSH）可能會干擾測定。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

1. Amplite Red 過氧化物酶底物儲備溶液 （100X）：

將 250 μL DMSO（組分 E）加入到小瓶的 Amplite™™ Red 底物（組分 A）中。應及時使用此儲備溶液。

2.過氧化物酶儲備溶液（20 U / mL）：

將1 mL測定緩沖液（組分C）加入辣根過氧化物酶（組分D）小瓶中。

3. H2O2標準溶液 （20 mM）：

加入22.7 μL 的3% H2O2（0.88 M，組分B）放入977μL檢測緩沖液（組分 C）中。注意：稀釋的H2O2溶液不穩定。任何未使用的部分都應丟棄。

標準溶液的制備

H2O2 標準

加入 1μL20 mM H2O2將溶液儲備到1999μL測定緩沖液（組分C）中，以獲得 10μM H2O2標準 （HS7）。取10μM H2O2標準并進行 1：3 系列稀釋以獲得 H 的連續稀釋液2O2標準（HS6 - HS1）。

工作溶液的制備

將50μL Amplite™ 紅色過氧化物酶底物儲備溶液（100X）和200μL 過氧化物酶儲備溶液（20 U/mL）加入4.75 mL檢測緩沖液（組分 C）中，使總體積為 5mL。注意：避光保存。

實驗方案樣本

H₂O₂上清液測定

1. 準備 H₂O₂根據表96和表1中提供的布局，將標準品（HS）、空白對照（BL）和測試樣品（TS）放入純黑色2孔微孔板中。對于384孔板，每孔使用25μL 試劑而不是50μL。

2. 加入 50 μL H₂O₂工作溶液進入H的每個孔中₂O₂標準、空白對照和測試樣品，使總H₂O₂測定體積為100μL/孔。對于384孔板，加入25μL H₂O₂相反，工作溶液的總體積為50μL/孔。

3. 將反應在室溫下孵育15至30分鐘，避光。

4. 使用熒光酶標儀在激發= 540±10 nm，發射= 590±10 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm）監測熒光增加。注意：板的內容物也可以轉移到白色透明底部微孔板中，并由吸光度酶標儀在576±5nm的波長下讀取。然而，與熒光讀數相比，吸收檢測的靈敏度較低。

H₂O₂細胞檢測

Amplite™熒光過氧化*檢測試劑盒可用于測量H的釋放₂O₂從細胞。以下是建議的方案，可以修改以滿足特定的研究需求。

1. The H₂O₂細胞工作溶液應按上述方式制備，但應用細胞培養系統中使用的培養基替換檢測緩沖液（組分C）。建議的培養基包括（a）克雷布斯林格斯磷酸鹽緩沖液（KRPB）;（b） 漢克斯平衡yan溶液;或 （c） 無血清培養基。

2. 在96孔板（50 - 100μL/孔）中制備細胞，并根據需要激活細胞。注意：包括陰性對照（單獨培養基和非活化細胞）用于測量背景熒光。對于384孔板，改用25μL/孔的細胞培養基。

3. 加入50μL H₂O₂細胞工作溶液進入每個細胞孔和H₂O₂標準。對于384孔板，加入25μL H₂O₂將細胞工作溶液改為放入每個孔中。

4. 將反應在室溫下孵育15至30分鐘，避光。

5. 使用熒光酶標儀在激發= 540±10 nm，發射= 590±10 nm（最佳Ex /Em = 540/590 nm）監測熒光增加。

 AATBioquestAmplite熒光過氧化氫測定試劑盒 

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